Cassification
本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫學(xué)診斷
人(Human)磷酸化Tau蛋白(p-Tau)
ELISA檢測試劑盒
使用說(shuō)明書(shū)
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被磷酸化Tau蛋白(p-Tau)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的磷酸化Tau蛋白(p-Tau)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完-全溶解后再使用。
2. 實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
4. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱(chēng) | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無(wú) |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無(wú) |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
底物B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無(wú) |
說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 | 無(wú) |
自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無(wú) |
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、125、250、500、1000、2000 pg/mL
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
2. 自動(dòng)洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪制標準曲線(xiàn):在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性:標準品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:最-低檢測濃度小于10 pg/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。
4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6個(gè)月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗或人體實(shí)驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗者承擔,本公司概不負責。
2. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作,實(shí)驗者違反說(shuō)明書(shū)操作,后果由實(shí)驗者承擔。
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